Primero definiremos como registrar nuestra semilla. Se debe diseñar algún sistema alfanumérico, así no tendrá que escribir los largos nombres de los cruces todo el tiempo. Por supuesto, se deben escribir los nombres en algún lado. El sistema que utilizo es escribir en un libro el número y el nombre asignado a ese número.

Puede usar un código de fecha u otro sistema alfanumérico en combinación para evitar duplicidad o confusión. En el libro mayor, escriba el nombre del cruce después del número asignado y registre la fecha cuando fue hecho el cruce y la fecha de la siembra, y deje espacio para registrar la información acerca del resultado del cruce, etc. Esta bitácora será una herramienta invaluable como referencia para futuros cruces y para evaluar los aciertos de las plantas escogidas como padres, etc.

Lo siguiente es marcar la cápsula con una pluma fina de tinta indeleble con el número asignado. Por supuesto este número debe ser colocado en los frascos de siembra o contenedores de semilla. Encontré que es fácil agrupar no más que una media docena de cápsulas al mismo tiempo para ser sembradas en la cabina.

Ahora necesitaremos algunas herramientas. Necesitará algunos escalpelos desechables, un cepillo de dientes, dos contenedores tipo tupperware con tapa y capacidad de 2 pintas o su equivalente, 4 litros  de blanqueador de ropa (lavandina en Argentina). Si está trabajando en una cámara de flujo laminar, querrá trabajar con guantes de cocina con las mangas enrolladas para evitar que el cloro gotee en sus brazos y le queme la piel. A propósito, los escalpelos se venden en tiendas que surten de material a los hospitales. Obtenga algunos con mango de plástico y hojas fijas. Para la siembra de semillas son preferibles de hojas rectas a los que tienen hojas curvas.

Después que marcamos la cápsula con su número, podemos remojarla en una solución de cloro (30% con agua de grifo) en un contenedor tupperware por 10-15 min. Ahora tomaremos el cepillo de dientes , cepillaremos la cápsula y la volvemos a remojar. Mientras hace esto, remoje los escalpelos en la misma solución de cloro. Ahora tomaremos la punta del tallo con la mano izquierda, mientras con la otra tomamos el escalpelo con la hoja hacia arriba para que el cloro fluya hacia la mano enguantada, drenando y alejando la solución de la hoja. Ahora puede hacer un corte como a un melón. Ahora vayamos un paso atrás en el proceso. Los frascos en los cuales va a ser sembrada la semilla deberán estar cubiertas con la hoja de aluminio con que se esterilizaron (al menos cuatro capas de grueso), Justo antes de intentar abrir la cápsula, se removerá la hoja junto con el tapón como una unidad, se rociará la caja entera con una fina niebla de solución de blanqueador al 30%. Si utiliza una cabina de flujo laminar no tiene que hacer esto. Ahora regresemos a la cápsula. Con el escalpelo raspe una porción de semilla y deposítela en uno de los frascos de siembra. Yo no confío en mí mismo y siempre hago una segunda siembra, en el caso de que algo suceda con el primer frasco, pero hágalo como Ud. prefiera. Ahora tape de nuevo el frasco y cruce los dedos por 2-6 semanas. Felizmente podremos ver que hay algo verde ahí dentro.

  (Aclaración: blanqueador = cloro= lavandina)

TECNICAS DE SIEMBRA DE SEMILLA SECA

La semilla seca es otra historia. Una vez que la cápsula se abre y derrama su semilla, o se parte aunque sea ligeramente, se asume que la semilla está contaminada con bacterias o esporas de hongos. El problema más grave son las esporas de hongos. Estas se protegen con una capa impermeable que las protege en gran medida de los químicos y el calor mientras se presentan las condiciones favorables para su desarrollo. Para esterilizar las semillas de orquídeas, se deben exponer a un esterilizante capaz de matar las bacterias y evitar el desarrollo de los hongos, pero no matar las semillas al mismo tiempo. Existen algunos químicos para este propósito, y la mayoría de ellos son del tipo de sal clorada con sodio o potasio. Yo he tenido bastante éxito con el blanqueador casero. El truco es exponer la semilla el tiempo suficiente para que la solución mate al enemigo y no a las semillas. Encontré que un 5% de blanqueador hecho con agua destilada, cuando se expone por un tiempo de 10 min, seguidos de dos enjuagues de agua destilada, trabaja en un 70-80% de casos de semillas contaminadas.

El procedimiento exacto es simple: Primero etiquete 1-2 frascos madre (frascos de siembra) con el código de la semilla que desea descontaminar. Etiquete una redoma o tubo de ensaye que haya sido estrilizada en autoclave, su boca y tapón deberán estar cubrirse 1 o 2 pulg con 4 hojas de papel aluminio. En la redoma estéril coloque la mitad de la semilla y añada una solución de blanqueador al 5% y agite intermitentemente. En los últimos 2 minutos la semilla se asentará o flotará sin agitar. Entonces decante el exceso a medio minuto de la marca de 10 minutos. En el último momento añada agua destilada a las semillas y agite por 1 min. Otra vez decante la solución y repita de nuevo el proceso pero no decante toda la solución. Abra el frasco de siembra y agite las semillas y agua para que la semilla se suspenda y vacíela en el frasco de siembra. Vuelva a tapar el frasco con la tapa y el aluminio. Si todo sale bien, se verá la germinación en unas semanas. Si se falla en el primer intento, se repite con las semillas guardadas. Si todo falla, se deberá repetir el cruce el próximo año. Lleve un registro de todos sus resultados del intento de hacer el cruce, etc. Llevar un buen registro es muy importante en el negocio de la hibridación.

Una vez que haya tenido éxito al hacer la siembra en los frascos, se deberán colocar en un sitio cálido (21-23ºC) con buena luz para cultivarlos. Le sugiero luz artificial, incandescente o fluorescente por un periodo de 8 horas diarias, o luz solar pero bien filtrada. No trate de emular los periodos de luz solar con luz artificial, esto solo retrasará el crecimiento y causará problemas con la producción de fenol, un signo de estrés, y toxicidad para el desarrollo de los protocormos.

TRASPLANTE

Después de algunas semanas, sus semillas deberán germinar. ¡Pero no se apresure a replantar! Sus protocormos deberán tener un tamaño adecuado para ser manejados con las herramientas de replante y permitan una fácil manipulación y separación. ¡No sobrepoble los frascos de replante! Muchas plantas incluyendo las orquídeas no crecen bien si compiten por el espacio y el alimento con muchas otras.

Cuando inicie el replante a otros frascos, considere el número que crecerán en el espacio del nuevo frasco. ¡Si tiene dudas, replante menos! También considere el número de plantas que le gustaría tener cuando crezcan. Recuerde que las plantas cuando son pequeñas ocupan poco espacio, pero cuando crezcan, ocuparán mucho más.

Necesitamos algunas herramientas para esta tarea llamadas horquillas de replante. Me gusta hacer las mías propias con varillas de acero inoxidable, con las puntas aplanadas como cuchillos o tenedores o en forma de ganchos. Necesitará también una botella con solución de blanqueador al 30%, también necesitará un par de tupperware o platos de vidrio para empapar las herramientas antes de manipular los frascos madre, guantes y una botella de 1/4 de agua destilada y estéril cubierta con 4 capas de papel aluminio

Una manera que me gusta hacer cuando el frasco madre está realmente atiborrado, es hacer un frasco de propagación. Es un frasco intermedio que contiene un gran número de protocormos, pero no es un frasco de replante. Este frasco de propagación permite crecer un poco más a los protocormos antes del replante final, Esto le permite también hacer un frasco de replante más equitativo en crecimiento. También cuando un frasco de propagación está terminado, el tiempo que toma para crecer a un tamaño necesario para el replante es mas corto y puede ahorrar muchas semanas de crecimiento.

Comience por seleccionar el frasco madre y el número de frascos de replante que transferirá, junto con las herramientas dentro de la cabina de replante o cabina de flujo laminar. Coloque sus horquillas de replante en uno de los depósitos con una solución de blanqueador al 30%. Deje los instrumentos en la solución por 30 minutos, mientras etiquete los frascos para el replante con el número asignado al tipo de semilla. También llene un rociador con solución de blanqueador al 30%. Ahora estamos listos para abrir el frasco madre. Si está trabajando en una cabina hermética, entonces primero deberá limpiar el área de trabajo para remover cualquier espora o bacteria. Así que con los guantes y con todo dispuesto dentro de la cabina, rocíe todas las áreas de la caja con un rocío fino de solución de cloro. También rocíe las tapas de los frascos que serán abiertos, la botella de agua destilada estéril que será utilizada para el enjuague de las herramientas y los guantes, que es seguro que necesitan limpieza. Ahora que ha rociado, deje que la neblina se asiente y deje que el cloro mate cualquier criatura que esté en las cosas mencionadas.

Ahora abra el frasco madre, o frasco de propagación y los frascos de replante que van a ser llenados con protocormos. Coloque las tapas con las hojas de aluminio en una sola pieza a un lado y fuera del área de trabajo. Ahora es importante pensar acerca de donde están las manos cuando está haciendo el trabajo de trasplante. Esta es parte de la técnica que deberá desarrollar para minimizar la contaminación. Como mencioné antes, me gusta usar dos depósitos para esterilizar las horquillas antes del replante. En el primer depósito todas las horquillas permanecen al principio, después que son usadas, se pasan al segundo depósito. Cuando todas las horquillas son usadas, comienzo de nuevo después de un descanso de 20 minutos para que la última horquilla se remoje en el depósito 1.

Tomo una horquilla del primer depósito, abro la botella de agua destilada y lavo la horquilla, después levanto la horquilla en forma vertical para que el agua drene hacia abajo. Inserto l horquilla en el frasco madre y comienzo a trabajar los protocormos, los aparto y los paso al frasco de replante. Me gusta trabajar los protocormos sobre la pared del frasco en lugar de la parte media, ya que es muy blanda y no permite mucha presión. Es bueno contar los protocormos que se traspasan porque es fácil plantar más de lo indicado. Yo planto usualmente entre 25 a 35 plantas en frascos de 500 ml, dependiendo de la superficie del frasco que se pueda utilizar. Cuando se hayan trasplantado 2 a 4 frascos, es buena idea cambiar de horquilla. Déjenme ir un poco atrás. Traten de limitar al mínimo el número de entradas al frasco madre, así que usen una horquilla para mover los protocormos desde el frasco madre al frasco de replante y una horquilla o más para hacer el replante final. si hay un contacto accidental de la horquilla con algo sucio, o un lapsus mental, debe cambiar las horquillas.

Ahora que el replante está listo, puede disfrutar del crecimiento de las plantas. Debe colocar las plantas en un sitio cálido (21-23ºC) y seco con 8 hs. de luz artificial (alrededor de 100 fc) o con luz natural (300 fc) medida al mediodía en un día claro. No trate de igualar la duración del tiempo del día solar con luz artificial porque hay importantes diferencias. No trataré el porqué en este artículo, pero créanme por el momento.